VIII Simposio Internacional de Química y Ciencias Farmacéuticas

SICF

VIII Simposio “Diseño, Obtención y Desarrollo de Fármacos”

DESARROLLO Y VALIDACIÓN DE UN ENSAYO IN VITRO PARA EVALUAR LA POTENCIA DEL AcM ITOLIZUMAB EN LA LÍNEA CELULAR HEK-293/CD6 MEDIANTE CITOMETRÍA DE FLUJO

Resumen

La molécula CD6 es un marcador de células T involucrado en su regulación y expresión. La sobreexpresión see ha correlacionado con enfermedades autoinmunes humanas. Itolizumab es un anticuerpo monoclonal humanizado (mAb) específico por el CD6 humano con efectos inmunomoduladores y antiinflamatorios. Este anticuerpo es capaz de bloquear la interacción CD6-CD166 en la superficie celular. La HEK-293/CD6 es una línea celular humana procedente de riñón embrionario transfectado con la molécula CD6. Durante el proceso de desarrollo del Itolizumab, se diseñó un bioensayo se basado en la unión anticuerpo-antígeno expresado en la superficie celular. Un bioensayo basado en el mecanismo de acción es fundamnetal para determinar la potencia y la estabilidad relativas del fármaco, proporcionando una evaluación de su actividad biológica.

Se desarrolló y validó un nuevo bioensayo de acuerdo con las agencias regulatorias internacionales USP y la ICH. El nuevo bioensayo se basa en la determinación de la potencia relativa del Itolizumab mediante citometría de flujo.

El método fue validado por su especificidad, precisión relativa (estudio de linealidad dilucional), exactitud (repetibilidad), rango y robustez. El bioensayo demostró ser robusto, exacto con un coeficiente de correlación R2= 0,989 y preciso, con coeficiente de variación (CV) < 13% en todos los niveles evaluados. Los estudios de recobrado de las muestras demostraron que el bioensayo es preciso y lineal en el rango 50% al 141 %. El ensayo también fue específico ya que pudo detectar cambios estructurales en Itolizumab debido a la degradación, las impurezas o los excipientes.

Abstract

The CD6 molecule is a pan T cell marker involved in T cell regulation and its expression has been correlated with human autoimmune diseases. Itolizumab is a humanized monoclonal antibody (mAb) specific for human CD6 with immunomodulatory and anti-inflammatory effects. This antibody is able to blockade CD6-CD166 interaction in the cell-surface. The HEK-293/CD6 is a human cell line originated of embryonic kidney transfected with CD6 molecule. During itolizumab development process the bioassay was based upon mAb binding to a cell-surface expressed antigen. The mechanism of action-based bioassay is essential to report on the drug’s relative potency and stability, by providing an assessment on its biological activity.

However, the design of a robust bioassay that models its mechanism of action to support potency assessment throughout clinical development is necessary. A new bioassay was developed and validated according to USP and ICH guidelines. The new bioassay is based on determining the potency of itolizumab using flow cytometry detection.

The method was validated for its specificity, relative accuracy (dilutional linearity study), precision (repeatability), range and robustness. The bioassay demonstrated to be robust, accurate with a correlation coefficient R2= 0,989 and precise, with coefficient of variation (CV) < 13% at all the evaluated levels. Sample recovery studies demonstrated the bioassay is accurate and linear from 50 to 141%. The assay was also specific since it was able to detect structural changes in itolizumab due to degradation, impurities or excipients.