En este trabajo se llevó a cabo un estudio de la influencia de la aplicación de un pre-tratamiento con enzimas (ZY maXX XL 200) a tres diferentes substratos agrícolas (pasto mulato, pasto natural y CT-115) para estudiar su potencialidad en la producción de metano. El pre-tratamiento consistió en la adición de una enzima (ZY maXX XL 200) en dosis de 100 µl/jeringas por 350 mg de substratos en 30 -1 mL de Inoculum vacuno. Los resultados de los substratos biodigestados, fueron comparados con los obtenidos sin la adición de la enzima investigada. En todos los casos, se lograron incrementos significativos en el rendimiento específico de metano. Los mejores resultado tuvieron lugar con el pasto mulato (0,268 m 3 CH 4 /kg VS); seguidos del CT-115 (0,258 m 3 CH 4 /kg VS) y culminando con el pasto natural (0,254 m 3 CH 4 /kg VS) obteniéndose incrementos cuando se utilizó el pre-tratamiento con enzimas e Inoculum vacuno Vs cuando este no fue utilizado. Por otra parte, se demostró que el pH evolucionó de una manera similar en las biomasas que utilizaron el pretratamiento con enzima y sin este.