Executive Secretary

IX Simposio Internacional de Química y Ciencias Farmaceúticas

SIQF 2025

IX Simposio “Diseño, obtención y desarrollo de fármacos” y IV Simposio Internacional “Química de los productos naturales”

Caracterización por LC-MS/MS de SOBERANA®02, una vacuna conjugada contra SARS-CoV-2.

Problemática: SOBERANA®02 es una vacuna conjugada anti-SARS-CoV-2 segura y eficaz, producida mediante la química maleimido-tiol. Objetivo: dar a conocer la composición proteica del preparado de TT utilizado en SOBERANA®02, las modificaciones químicas y el entrecruzamiento introducidos por el tratamiento con formaldehído para la desintoxicación; estudiar el proceso de activación del TT para su posterior conjugación y determinar los sitios de conjugación en SOBERANA®02 mediante la identificación de péptidos de tipo 2.

Metodología: El conjugado se digirió junto con LEP y tripsina usando el protocolo de digestión MED-FASP. La mitad de la mezcla de péptidos se analizó directamente mediante LC-MS/MS y la otra se purificó mediante cromatografía de afinidad Ni-NTA antes del LC-MS/MS, y el eluyente resultante se enriqueció en péptidos de tipo 2 que contenían el extremo C-terminal del péptido del RBD conjugado a residuos de lisina en péptidos trípticos derivados principalmente de la neurotoxina tetánica detoxificada (d-TeNT).

Resultados: El análisis LC-MS/MS reveló la compleja composición proteica del TT. Las quince proteínas más abundantes representan aproximadamente el 78% de la masa proteica total, siendo la d-TeNT la proteína más abundante (30-56%), independientemente del método de cuantificación utilizado.

Conclusiones: El análisis LC-MS/MS de la reacción de activación de d-TeNT con BMPS mostró que 102 (95%) de los 107 residuos de lisina incorporaban un grupo maleimido. De ellos, sólo 22 residuos de Lys (20%) estaban reticulados al péptido tríptico C-terminal de la RBD (538CVNF541-HHHHHH).

Problem: SOBERANA®02 is a safe and effective SARS-CoV-2 conjugate vaccine produced using maleimide-thiol chemistry. Objective: To determine the protein composition of the TT preparation used in SOBERANA®02, the chemical modifications and cross-linking introduced by formaldehyde treatment for detoxification; to study the TT activation process for subsequent conjugation; and to determine the conjugation sites in SOBERANA®02 by identifying type 2 peptides.

Methodology: The conjugate was digested with LEP and trypsin using the MED-FASP digestion protocol. Half of the peptide mixture was analyzed directly by LC-MS/MS, and the other half was purified by Ni-NTA affinity chromatography prior to LC-MS/MS. The resulting eluent was enriched in type 2 peptides containing the C-terminus of the RBD peptide conjugated to lysine residues in tryptic peptides derived primarily from detoxified tetanus neurotoxin (d-TeNT).

Results: LC-MS/MS analysis revealed the complex protein composition of TT. The fifteen most abundant proteins accounted for approximately 78% of the total protein mass, with d-TeNT being the most abundant protein (30–56%), regardless of the quantification method used.

Conclusions: LC-MS/MS analysis of the d-TeNT activation reaction with BMPS showed that 102 (95%) of the 107 lysine residues incorporated a maleimide group. Of these, only 22 Lys residues (20%) were crosslinked to the C-terminal tryptic peptide of the RBD (538CVNF541-HHHHHH).