Executive Secretary

IX International Symposium on Chemistry and Pharmaceutical Sciences

SIQF 2025

9th Symposium “Design, production and development of drugs” and 4th International Symposium “Chemistry of natural products”

Characterization by LC-MS/MS of SOBERANA®02, a conjugate vaccine against SARS-CoV-2.

Problem: SOBERANA®02 is a safe and effective SARS-CoV-2 conjugate vaccine produced using maleimide-thiol chemistry. Objective: To determine the protein composition of the TT preparation used in SOBERANA®02, the chemical modifications and cross-linking introduced by formaldehyde treatment for detoxification; to study the TT activation process for subsequent conjugation; and to determine the conjugation sites in SOBERANA®02 by identifying type 2 peptides.

Methodology: The conjugate was digested with LEP and trypsin using the MED-FASP digestion protocol. Half of the peptide mixture was analyzed directly by LC-MS/MS, and the other half was purified by Ni-NTA affinity chromatography prior to LC-MS/MS. The resulting eluent was enriched in type 2 peptides containing the C-terminus of the RBD peptide conjugated to lysine residues in tryptic peptides derived primarily from detoxified tetanus neurotoxin (d-TeNT).

Results: LC-MS/MS analysis revealed the complex protein composition of TT. The fifteen most abundant proteins accounted for approximately 78% of the total protein mass, with d-TeNT being the most abundant protein (30–56%), regardless of the quantification method used.

Conclusions: LC-MS/MS analysis of the d-TeNT activation reaction with BMPS showed that 102 (95%) of the 107 lysine residues incorporated a maleimide group. Of these, only 22 Lys residues (20%) were crosslinked to the C-terminal tryptic peptide of the RBD (538CVNF541-HHHHHH).

Problemática: SOBERANA®02 es una vacuna conjugada anti-SARS-CoV-2 segura y eficaz, producida mediante la química maleimido-tiol. Objetivo: dar a conocer la composición proteica del preparado de TT utilizado en SOBERANA®02, las modificaciones químicas y el entrecruzamiento introducidos por el tratamiento con formaldehído para la desintoxicación; estudiar el proceso de activación del TT para su posterior conjugación y determinar los sitios de conjugación en SOBERANA®02 mediante la identificación de péptidos de tipo 2.

Metodología: El conjugado se digirió junto con LEP y tripsina usando el protocolo de digestión MED-FASP. La mitad de la mezcla de péptidos se analizó directamente mediante LC-MS/MS y la otra se purificó mediante cromatografía de afinidad Ni-NTA antes del LC-MS/MS, y el eluyente resultante se enriqueció en péptidos de tipo 2 que contenían el extremo C-terminal del péptido del RBD conjugado a residuos de lisina en péptidos trípticos derivados principalmente de la neurotoxina tetánica detoxificada (d-TeNT).

Resultados: El análisis LC-MS/MS reveló la compleja composición proteica del TT. Las quince proteínas más abundantes representan aproximadamente el 78% de la masa proteica total, siendo la d-TeNT la proteína más abundante (30-56%), independientemente del método de cuantificación utilizado.

Conclusiones: El análisis LC-MS/MS de la reacción de activación de d-TeNT con BMPS mostró que 102 (95%) de los 107 residuos de lisina incorporaban un grupo maleimido. De ellos, sólo 22 residuos de Lys (20%) estaban reticulados al péptido tríptico C-terminal de la RBD (538CVNF541-HHHHHH).