VIII Simposio Internacional de Química y Ciencias Farmacéuticas

VIII Conferencia "Ciencias Químicas"

Un método simple y robusto para la detección de Mycoplasma en líneas celulares usando Sybr Green

Resumen

La contaminación de las líneas celulares por micoplasma es un hecho común que afecta el comportamiento de la línea celular de varias maneras. Se han desarrollado varias técnicas para la detección e identificación de contaminaciones por micoplasma en cultivos celulares. Estas técnicas incluyen cultivo, serología o ensayos moleculares; sin embargo, a menudo consumen mucho tiempo, no llegan a ser sensibles y son muy laboriosas.

Se diseñó un nuevo ensayo de PCR en tiempo real usando Syber Green y empleando cebadores que se hibridan con secuencias de genes que codifican el ARNr 16 S conservado evolutivamente de unas 6 especies de micoplasma diferentes (más frecuente en cultivos celulares).

El ensayo de PCR en tiempo real descrito tuvo un 100 por ciento de concordancia con muestras controles positivas testadas por ensayos internacionales y mostró una sensibilidad superior a las técnicas de PCR en tiempo final utilizadas hasta el momento en el país. Es un nuevo método diagnóstico más rápido, sensible y sencillo.

Abstract

Mycoplasma contamination of cell lines is a common occurrence that affects cell line behavior in several ways. Various techniques have been developed for the detection and identification of mycoplasma contamination in cell cultures. These techniques include culture, serology, or molecular assays; however, they are often time consuming, insensitive, and labor intensive.

A new real-time PCR assay was designed using Syber Green and employing primers that hybridize to gene sequences encoding the evolutionarily conserved 16S rRNA from some 6 different mycoplasma species (most commonly found in cell culture).

The described real-time PCR assay had 100% concordance with positive control samples tested by international assays and showed a higher sensitivity than the end-time PCR techniques used so far in the country. It is a new diagnostic method that is faster, more sensitive and simpler.