VIII Simposio Internacional de Química y Ciencias Farmacéuticas

SICF

VIII Simposio “Diseño, Obtención y Desarrollo de Fármacos”

Bioensayo colorimétrico para determinar la potencia del anticuerpo monoclonal anti-EGFR.

Resumen

Durante el desarrollo de un producto biológico los ensayos de potencia constituyen una parte critica, debido a que vinculan la fabricación del producto con las diferentes etapas de la clínica, al traducir las propiedades bioquímicas y la estabilidad de una molécula con su actividad biológica. A veces puede ser necesario reemplazar un método de potencia existente con un método mejorado o nuevo. Durante la fase inicial del proceso de desarrollo de nimotuzumab, el bioensayo se basó en la unión del anticuerpo monoclonal a un antígeno expresado en la superficie celular en células viables y se evaluó mediante citometría de flujo. Para las fases tardías, se desarrolló y validó un nuevo ensayo de potencia relativa, de acuerdo con las directrices de la USP y la ICH. El nuevo bioensayo se basa en la inhibición de la proliferación de células NCI-H292 en respuesta al nimotuzumab. Durante la validación se evaluaron los parámetros: especificidad, precisión relativa, precisión, rango y solidez. El bioensayo demostró ser robusto, sensible, con especificidad y buena linealidad (coeficiente de determinación de 0.9732), preciso con coeficientes de variación inferiores al 11% tanto para repetibilidad como para precisión intermedia. Los estudios de recuperación de muestras demostraron que el bioensayo es preciso y lineal del 50 al 150 %. El ensayo también indicó estabilidad, ya que pudo detectar cambios en muestras degradadas de nimotuzumab y puede reflejar mejor la fluctuación de calidad de diferentes lotes.

Abstract

During the various stages of the clinical and process development, potency assays are a critical part of any biologics. Potency assays are linking manufacturing with the clinics by translating biochemical properties and stability of a molecule with its biological activity. Sometimes it may become necessary to replace an existing potency method with an improved or new method. Through early phase of nimotuzumab development process the bioassay was based upon mAb binding to a cell-surface expressed antigen on viable cells and assessed via flow cytometry. For late phases, a new relative potency assay was developed and validated, according to USP and ICH guidelines. The new bioassay is based on the inhibition of NCI-H292 cell proliferation in response to nimotuzumab and was validated for its specificity, relative accuracy (dilutional linearity study), precision (repeatability & Inter run variability), range and robustness. The bioassay demonstrated to be robust, sensitive, leading a specific and good linearity (coefficient of determination of 0.9732), precise with coefficients of variation (CV) less than 11% for both repeatability and intermediate precision. Sample recovery studies demonstrated the bioassay is accurate and linear from 50 to 150%. The assay was also stability-indicating since it was able to detect changes in nimotuzumab degraded samples and can better reflect the quality fluctuation of different batches. The new bioassay requires level of receptor occupancy and target turnover, two key components for further understanding the link between clinical drug exposure and in vitro potency.