VIII Simposio “Diseño, Obtención y Desarrollo de Fármacos” "SICF"

VIII Simposio Internacional de Química y Ciencias Farmacéuticas

SICF

VIII Simposio “Diseño, Obtención y Desarrollo de Fármacos”

Caracterización por LC-MS/MS de SOBERANA®02

Resumen

SOBERANA®02 es una vacuna conjugada eficaz contra el COVID-19 basada en la conjugación química del Receptor Binding Domain (RBD) del virus SARS-CoV-2 y el preparado de toxoide tetánico inactivado. El conjugado se digirió junto con LEP y tripsina usando el protocolo de digestión MED-FASP. La mitad de la mezcla de péptidos se analizó directamente mediante LC-MS/MS y la otra se purificó mediante cromatografía de afinidad Ni-NTA antes del análisis LC-MS/MS, y el eluato resultante se enriqueció en péptidos de tipo 2 que contenían el extremo C-terminal del péptido del RBD (538CNVF541-HHHHHH) conjugado a residuos de lisina en péptidos trípticos derivados principalmente de la neurotoxina de C. tetanis. El RBD del SARS-CoV-2, así como 385 proteínas del toxoide tetánico, se identificaron coincidentemente con un FDR ≥ 1 % mediante tres softwares: MASCOT, Peaks y Maxquant. Entre las proteínas derivadas de C. tetanis, la neurotoxina inactivada fue la proteína más abundante representando el 30-60 % del total de proteínas según los resultados proporcionados por los métodos de estimación de abundancia de proteínas 3-top, TPA e iBAQ. Se asignaron quince sitios de conjugación entre la neurotoxina y el RBD recombinante del SARS-CoV-2 según los espectros de MS/MS.

Abstract

SOBERANA®02 is an effective conjugate vaccine against COVID-19 based on the chemical conjugation of the Receptor Binding Domain (RBD) of the virus SARS-CoV-2 and the inactivated tetanus toxoid preparation. This conjugate was digested in tandem with LEP and trypsin using the MED-FASP digestion protocol. Half of the peptide mixture was directly analyzed by LC-MS/MS and the other half was purified by using Ni-NTA affinity chromatography before LC-MS/MS analysis, and the resultant eluate was enriched in type 2 peptides containing the C-terminal peptide of the RBD (538CNVF541-HHHHHH) cross-linked to several internal lysine residues in tryptic peptides derived mainly from the neurotoxin of C. tetanis. The RBD of SARS-CoV-2 as well as 385 proteins of the tetanus toxoid were coincidently identified with an FDR ≥ 1 % by three softwares: MASCOT, Peaks and Maxquant. Among the proteins derived from C. tetanis, the inactivated neurotoxin was the most abundant protein representing 30-60 % of the total proteins according the results provided by the 3-top, TPA and iBAQ protein abundance estimation methods. Fifteen conjugation sites between the neurotoxin and the recombinant RBD of SARS-CoV-2 were assigned based on the MS/MS spectra.

Sobre el ponente

Olivia Martínez Armenteros

Olivia Martínez Armenteros

Instituto Finlay de Vacunas Flag of Cuba

Discussion

Información Práctica
Ponencia
Spanish / Español
noviembre 14, 2023 10:40 a. m.
10 minutos
Sala Polivalente A
Autores
Olivia Martínez Armenteros
Luis Javier González
Darielys Santana
Satomy Pousa
Jacek Wisniesky
Michel Batista
Paulo Carvalho
Daniel García
Jean-Pierre Soubal
Raine Garrido
Dagmar García
Yuri Valdes-Balbín
Vicente Vérez Bencomo
Palabras clave
conjugate vaccine
covid-19
cross-linked peptides
péptido crosslinkeado
rbd
tetanus toxoid
toxoide tetánico
vacuna conjugada
Documentos