VII Simposio Internacional de Ciencias Farmacéuticas 2019 "VII SICF" -VII Simposio "Diseño, Obtención y Desarrollo de Fármacos"

VII Simposio Internacional de Ciencias Farmacéuticas 2019

VII SICF

Obtención de transglutaminasa 2 humana recombinante (protein-glutamina: amina ɣ-glutamiltransferasa) para el diagnóstico de la enfermedad celíaca.

Resumen [ES]

La celiaquía es un proceso crónico, que lesiona primeramente el intestino y puede dañar cualquier órgano o tejido en personas genéticamente predispuestas. Es producida por una intolerancia permanente al gluten, conjunto de proteínas presentes en el trigo y otros cereales y la única enfermedad autoinmune de la que se conoce el agente que la desencadena (gliadina) y el autoantígeno (transglutaminasa-2). En el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología se fabrica la tira inmunoreactiva HeberFast®Line anti-transglutaminasa, para la detección de anticuerpos anti-transglutaminasa presentes en la sangre. El componente más crítico para la producción de este diagnosticador es la transglutaminasa de cobayo comercializada por Sigma-Aldrich, de forma activa, con bajo grado de pureza (33%) y secuencia aminoacídica con 80% de similitud a la transglutaminasa humana. En este trabajo reportamos la expresión de una variante artificial del gen humano en Escherichia coli Rosetta DE3 con un uso de codones optimizado para la bacteria, además con la mutación de la Cys277 para su inactivación catalítica. Se clonó en el vector pET22b que brinda la posibilidad de agregar una cola de seis histidinas al extremo carboxilo terminal de la proteína y facilita su purificación mediante cromatografía de afinidad a quelatos metálicos. La transglutaminasa recombinante se produjo de forma insoluble representando más del 20% de las proteínas bacterianas. Se solubilizó con SDS 1% y se purificó con una pureza superior al 93%, siendo reconocida por un anticuerpo policlonal comercial anti-transglutaminasa humana y por sueros de pacientes celíacos demostrando su competencia en el diagnóstico de esta enfermedad.

Resumen [EN]

La celiaquía es un proceso crónico, que lesiona primeramente el intestino y puede dañar cualquier órgano o tejido en personas genéticamente predispuestas. Es producida por una intolerancia permanente al gluten, conjunto de proteínas presentes en el trigo y otros cereales y la única enfermedad autoinmune de la que se conoce el agente que la desencadena (gliadina) y el autoantígeno (transglutaminasa-2). En el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología se fabrica la tira inmunoreactiva HeberFast®Line anti-transglutaminasa, para la detección de anticuerpos anti-transglutaminasa presentes en la sangre. El componente más crítico para la producción de este diagnosticador es la transglutaminasa de cobayo comercializada por Sigma-Aldrich, de forma activa, con bajo grado de pureza (33%) y secuencia aminoacídica con 80% de similitud a la transglutaminasa humana. En este trabajo reportamos la expresión de una variante artificial del gen humano en Escherichia coli Rosetta DE3 con un uso de codones optimizado para la bacteria, además con la mutación de la Cys277 para su inactivación catalítica. Se clonó en el vector pET22b que brinda la posibilidad de agregar una cola de seis histidinas al extremo carboxilo terminal de la proteína y facilita su purificación mediante cromatografía de afinidad a quelatos metálicos. La transglutaminasa recombinante se produjo de forma insoluble representando más del 20% de las proteínas bacterianas. Se solubilizó con SDS 1% y se purificó con una pureza superior al 93%, siendo reconocida por un anticuerpo policlonal comercial anti-transglutaminasa humana y por sueros de pacientes celíacos demostrando su competencia en el diagnóstico de esta enfermedad.

Sobre el ponente

María Teresa Barceló Avila

MsC. María Teresa Barceló Avila

CIGB SS Flag of Cuba
Información Práctica
Spanish / Español
No definido
30 minutos
No definido
Autores
José Miguel Fernández
Ana María Espinosa
Raúl Armas
MsC. María Teresa Barceló Avila
Lisbet Ulloa
Yeosvany Cabrera
Yeleiny Machín
Enrique Pérez
Palabras clave
celiaquía
cromatografía
gluten
transglutaminasa