Simposio Internacional de Ciencias Farmaceúticas
SICF
Abstract
The dehydration-rehydration technology for obtaining liposomal vesicles is based on the dehydration of a suspension of small unilamellar vesicles (SUV) in the presence of the solute to be encapsulated, followed by a controlled rehydration (DRVs). In this procedure, SUV are obtained by sonication on a laboratory scale. DELOS-susp methodology is a manufactured process based on compressed fluids that allows obtaining SUV in a single step. In this work, physicochemical characteristics of DRVs obtained from sonicated SUV (DRV's) or from DELOS-susp (DRV’d), were evaluated. Additionally, the antigen-specific immune responses induced by these two liposomal formulations were also explored. The lipids used were dipalmitoyl phosphatidylcholine and cholesterol (1: 1 molar ratio) and the antigens (Ags) encapsulated were the EGF-P64k conjugate or the ovalbumin (OVA) with the immunomodulatory protein Sticholysin II (StII). The OVA-specific cytotoxic T lymphocytes and the EGF-P64k-induced antibody responses were evaluated in C57BL/6 mice using DRV's and DRV'd. Both types of vesicles exhibited similar encapsulation efficiencies without statistic differences: EGF-P64k (≈30%), OVA (≈50%) and StII (≈55%). Likewise, statistically similar responses of OVA-specific effector CD8+ T cells and of EGF-specific IgG isotype antibodies, were corroborated with both liposomal formulations. These results suggest the feasibility of substituting the sonication step for DELOS-susp in the procedure for obtaining liposomes by dehydration-rehydration, which will enable the productive scaling of these liposomal formulations as immunoadjuvants
Resumen
La tecnología de deshidratación-rehidratación para la obtención de vesículas liposomales se basa en la deshidratación de una suspensión acuosa de vesículas unilamelares pequeñas (SUV) en presencia del soluto a encapsular, seguido de una rehidratación controlada (DRVs). En este procedimiento, las SUV se obtienen por sonicación, a escala de laboratorio. La metodología DELOS-susp es un proceso manufacturado, que emplea fluidos comprimidos y permite la obtención de SUV en un único paso. En este trabajo, se evaluaron características físico-químicas de DRVs, obtenidas a partir de SUV sonicadas (DRV’s), o de DELOS-susp (DRV’d). Adicionalmente, se exploraron las respuestas inmunes específicas de antígenos (Ags) inducidas por DRV’s y DRV’d. Los lípidos utilizados fueron dipalmitoil fosfatidilcolina y colesterol (relación molar 1:1) y los Ags encapsulados, el conjugado EGF-P64k o la ovalbúmina (OVA) con la proteína inmunomoduladora Sticholisina II (StII). Las respuestas de linfocitos T citotóxicos específicas a OVA y la respuesta de anticuerpos inducida por EGF-P64k se evaluaron en ratones C57BL/6 con el uso de DRV’s y DRV’d. Ambos tipos de vesículas exhibieron eficiencias de encapsulación similares y sin diferencias estadísticas: EGF-P64k (≈30%), OVA (≈50%) y StII (≈55%). Asimismo, se corroboró la inducción de respuesta de células T CD8+ efectora, específica a OVA, y anticuerpos de isotipo IgG específicos por el EGF, estadísticamente similares con ambas formulaciones liposomales. Estos resultados sugieren la factibilidad de sustituir la etapa de sonicación por DELOS-susp, en el procedimiento de obtención de liposomas mediante deshidratación-rehidratación, que permitirá el escalado productivo de estas formulaciones como inmunoadyuvantes.
About The Speaker
Prof. María del Carmen Luzardo Lorenzo