Las matrices biológicas son generalmente muy complejas en cuanto a su composición y en la mayoría de los casos contienen a los analitos de interés en concentraciones muy bajas, además que se pueden presentar interferencias que entorpecen el posterior análisis. La problemática del presente estudio es estudiar los métodos analíticos reportados para la determinación de compuestos en fluidos biológicos. El objetivo del presente trabajo es revisar de los métodos más empleados para estos fines y se realizan estudios de casos, como ejemplos prácticos de aplicación de los mismos. Metodología: los métodos de cuantificación más empleados para este tipo de estudio son los cromatográficos porque ofrecen un análisis completo que puede realizarse en un tiempo relativamente corto proporcionando la información necesaria para los análisis cualitativo y cuantitativo. La utilización del método, con estos fines, está condicionada al cumplimiento de los parámetros de validación, proceso mediante el cual se obtienen las pruebas documentales de la confiabilidad del mismo. Resultados y discusión: la determinación de fármacos o metabolitos en fluidos biológicos permite definir las propiedades y parámetros biofarmacéuticos que caractericen la absorción, biodistribución, metabolismo y excresión del fármaco, así como la cantidad y posibilidad para llegar al sitio de acción y de esta forma garantizar su efecto farmacológico. Conclusiones: la determinación de compuestos en fluidos biológicos  resulta un requisito indispensable para el registro de un medicamento.