Simposio Internacional de Ciencias Farmaceúticas

SICF

Optimization of the blue molybdenum method for estimating the antioxidant potential of natural products

Abstract

Problem: The actual experimental conditions of Molybdenum blue spectrophotometric method, used for antioxidant potential estimation, promote degradation of flavonoids, with potential interferences in the antioxidant capacity determination.
Objective: To evaluate the effects of physicochemical factors on the formation of the complex for optimizing the Total Antioxidant Activity method, for a better estimation of the antioxidant potential of natural products.
Methodology: A 3^4-1 fractional experimental design was applied. Independent variables were temperature, color development time, type of acid and acidity, and dependent variable was the absorbance of the complex. The effects of the reducing agent and its concentration, as well as the concentration of (NH₄)₆Mo₇O₂₄ 4H₂O) and Na₂HPO₄ were studied independently. The effect of acidity in a wide range of values, the color development time considering temperature, the influence of co-solvents (ethanol) and the antioxidant potency of various natural metabolites were also evaluated.
Results and discussion: Acid concentration and temperature greatly influenced on the complex formation, being type of acid and incubation time less significant. Ascorbic acid showed a shorter color development time than reference metabolites. Ethanol negatively influenced the amount of complex formed. The proposed conditions for developing the method are: Type of acid: HCl; acid concentration: 0.01 N; incubation temperature: 65 ºC; and incubation time: 40 min. Under these experimental conditions, the ranking order of antioxidant potency was: pyrogallol > quercetin > ascorbic acid > gallic acid > rutin.
Conclusions: The new conditions proposed for the phosphomolybdenum complex assay give a more reliable determination of the antioxidant activity for natural products.

Resumen

Problemática: Las condiciones experimentales del método espectrofotométrico del azul de fosfomolibdeno empleado para estimar el potencial antioxidante de productos naturales promueven la degradación de flavonoides, con interferencias potenciales en la determinación de su capacidad antioxidante.
Objetivo: Evaluar efectos de factores físico-químicos en la formación del complejo para optimizar el método de Actividad Antioxidante Total y mejorar la estimación del potencial antioxidante.
Metodología: Se aplicó un diseño experimental fraccionario 3^4-1. Las variables independientes fueron temperatura, tiempo de desarrollo del color, tipo de ácido y acidez, y variable dependiente absorbancia del complejo. Se estudiaron independientemente los efectos del agente reductor y su concentración, la concentración de (NH₄)₆Mo₇O₂₄.4H₂O) y Na₂HPO₄ . Luego fueron evaluados el tiempo de desarrollo del color considerando temperatura e influencia de cosolventes y el potencial antioxidante de metabolitos naturales.
Resultados y discusión: La concentración de ácido y la temperatura influyeron en la formación del complejo, resultando el tipo de ácido y tiempo de incubación menos significativos. El ácido ascórbico mostró un tiempo de desarrollo de color más corto que los metabolitos de referencia. El etanol influyó negativamente en la cantidad de complejo formado. Las condiciones propuestas para el método son: Tipo de ácido: HCl; concentración: 0.01 N; temperatura de incubación: 65 ºC; tiempo de incubación: 40 min. Bajo estas condiciones experimentales el orden de potencia antioxidante fue: pirogalol > quercetina > ácido ascórbico > ácido gálico > rutina.
Conclusiones: Las nuevas condiciones experimentales del ensayo del complejo de fosfomolibdeno ofrecen una determinación más confiable de la actividad antioxidante de produtos naturales.