VII Simposio Internacional de Química 2019 "SIQ 2019" -XII Conferencia "La Ingeniería Química: Desarrollo, potencialidades y sus retos"

VII Simposio Internacional de Química 2019

SIQ 2019

Obtención de NS3 recombinante para su uso en el diagnóstico de Hepatitis C

Resumen [ES]

Problemática: El diagnóstico serológico de la Hepatitis C en Cuba se realiza mediante un UMELISA desarrollado por el CIE, en el cual se usa como reactivo biológico la NS3 del Virus de la Hepatitis C recombinante. En el proceso productivo de la NS3 se observan inconsistencias en la expresión en Escherichia coli debido a la inefectiva regulación que a veces ofrece el promotor trp. Objetivo(s): clonar la secuencia que codifica para la NS3 en un vector de expresión bajo el promotor híbrido tac para mejorar la regulación de la expresión en E.coli. Metodología: El clonaje se llevó a cabo usando la metodología del ADN recombinante amplificando por PCR la región que codifica para la NS3 del plásmido pR2M6-NS3-His y se insertó en el plásmido PTBAD bajo el promotor Tac. Resultados y discusión: La nueva proteína expresada fue reconocida por anticuerpos monoclonales anti-NS3, anti-IL2 y anti-histidina, los tres fragmentos que conforman la proteína quimérica. La expresión de la NS3 fue evaluada en las cepas XL-1Blue, W3110 y C-600. Esta fue similar en las tres cepas con alrededor del 30 % de las proteínas totales. Sin embargo, la mayor regulación fue obtenida en la cepa C-600. Conclusiones: Se expresó la proteína recombinante Il-NS3-His bajo el promotor Tac aumentando los niveles de expresión y su regulación en el medio de cultivo. La cepa C600 mostró ser la cepa idónea para la expresión de la NS3 bajo el promotor Tac en medio LB. No se observaron diferencias significativas entre ambas proteínas en el kit UMELISA de Hepatitis C.

Resumen [EN]

Problemática: El diagnóstico serológico de la Hepatitis C en Cuba se realiza mediante un UMELISA desarrollado por el CIE, en el cual se usa como reactivo biológico la NS3 del Virus de la Hepatitis C recombinante. En el proceso productivo de la NS3 se observan inconsistencias en la expresión en Escherichia coli debido a la inefectiva regulación que a veces ofrece el promotor trp. Objetivo(s): clonar la secuencia que codifica para la NS3 en un vector de expresión bajo el promotor híbrido tac para mejorar la regulación de la expresión en E.coli. Metodología: El clonaje se llevó a cabo usando la metodología del ADN recombinante amplificando por PCR la región que codifica para la NS3 del plásmido pR2M6-NS3-His y se insertó en el plásmido PTBAD bajo el promotor Tac. Resultados y discusión: La nueva proteína expresada fue reconocida por anticuerpos monoclonales anti-NS3, anti-IL2 y anti-histidina, los tres fragmentos que conforman la proteína quimérica. La expresión de la NS3 fue evaluada en las cepas XL-1Blue, W3110 y C-600. Esta fue similar en las tres cepas con alrededor del 30 % de las proteínas totales. Sin embargo, la mayor regulación fue obtenida en la cepa C-600. Conclusiones: Se expresó la proteína recombinante Il-NS3-His bajo el promotor Tac aumentando los niveles de expresión y su regulación en el medio de cultivo. La cepa C600 mostró ser la cepa idónea para la expresión de la NS3 bajo el promotor Tac en medio LB. No se observaron diferencias significativas entre ambas proteínas en el kit UMELISA de Hepatitis C.

Sobre el ponente

José Miguel Fernández Torres

José Miguel Fernández Torres

CIGBSS Flag of Cuba
Información Práctica
Ponencia
Spanish / Español
No definido
30 minutos
No definido
Autores
María Teresa Barcelló Ávila
Alina Sobrino Legón
Teresa Barceló
Duniesky Martínez García
Onel Valdivia Pérez
José Miguel Fernández Torres
José Miguel Fernández Torres
Enrique Pérez Cruz
Ronny Camacho Pupo
Yeosvany Cabrera Artiles
Raúl Armas Ramos
Palabras clave
clonaje
diagnóstico
ns3
vhc