VIII International Symposium on Chemistry and Pharmaceutical Sciences
SICF
VIII Symposium "Design, Obtaining and Development of Drugs"
Abstract
SARS-CoV-2 has provoked a global crisis and death of millions of people. Several serological assays to determine the quality of the immune response against SARS-CoV-2 and the efficacy of vaccines have been developed, among them the gold standard conventional virus neutralization assays. However, these tests are time consuming, require biosafety level 3 (BSL3), and are low throughput and expensive. This has motivated the development of alternative methods, including molecular inhibition assays. Therefore, we aimed to develop an alternative method to measure SARS-CoV-2 blocking antibodies (NAb). With this platform, the objective was to detect the inhibition of the binding of the RBD-Fc fusion protein to ACE2 receptor on host cells, by immune sera (containing the NAbs), through the use of a peroxidase-based ELISA. Herein, we present a safe cell-based ELISA-virus neutralization test (cbE-VNT) as a surrogate for the conventional viral neutralization assays that detects the inhibition of SARS-CoV-2 RBD binding to ACE2-bearing cells independently of species. Our immunochemical test shows a very good correlation with the conventional and other immunoenzymatic neutralization assays and achieves 100% specificity and 95% sensitivity. cbE-VNT is cost-effective, fast and enables a large-scale serological evaluation that can be performed in a BSL2 laboratory, allowing its use in pre-clinical and clinical investigations.
Resumen
El SARS-CoV-2 ha provocado una crisis global y la muerte de millones de personas. Se han desarrollado varios ensayos serológicos para determinar la calidad de la respuesta inmune contra el SARS-CoV-2 y la eficacia de las vacunas, entre ellos los ensayos de neutralización viral convencionales (cVNT) (estándar de referencia). Sin embargo, estas pruebas consumen mucho tiempo, requieren del uso de instalaciones BSL3, son de bajo flujo de trabajo y costosas. Esto ha motivado el desarrollo de técnicas alternativas, como los ensayos de inhibición molecular. Por tanto, nos propusimos como objetivo desarrollar un método alternativo para detectar la inhibición de la unión de la proteína de fusión RBD-Fc al receptor de ACE2 en las células huésped, por anticuerpos neutralizantes (AcNs) presentes en sueros inmunes, utilizando como sistema de detección la enzima peroxidasa y el sustrato TMB. En este trabajo, presentamos el cbE-VNT como sustituto de los cVNT, que detecta la inhibición de la unión del RBD del SARS-CoV-2 a las células portadoras de ACE2, independientemente de la especie. Nuestra prueba inmunoquímica muestra una muy buena correlación con el cVNT y con otros ensayos de neutralización inmunoenzimáticos. Además, logra una especificidad del 100 % y una sensibilidad del 95 %. cbE-VNT es una técnica segura, económica, rápida, y permite una evaluación serológica a gran escala, que se puede realizar en un laboratorio BSL2, lo cual posibilita su uso en investigaciones preclínicas y clínicas.
About The Speaker
Franciscary Pi Estopiñan
Soy Lic. en Bioquímica y Biología Molecular, graduada de la Facultad de Biología de la Universidad de la Habana en el 2017. En ese mismo año empecé a trabajar como investigadora en el Centro de Inmunología de Molecular (CIM), en el grupo de Biomarcadores hasta febrero del 2022. Posteriormente, comencé en el Departamento de Proteínas Quiméricas del CIM como aspirante a investigador. Durante ese período de tiempo he realizado varios cursos de posgrados y adiestramiento. Estuve 3 meses en Barcelona en un entrenamiento en Biopsia Líquida en el Laboratorio de Oncología Molecular y Celular del Instituto Germans Trias i Pujol Research Institute (IGTP) y en el Laboratorio de Biología Molecular del Instituto Universitario Quiron-Dexeus (Pangaea Oncology), con el Dr. Rafael Rosell. He participado en 8 eventos tantos nacionales como internacionales. A su vez, soy coautora de 4 artículos, siendo primera autora de uno. Por otra parte, he recibido varios premios y reconocimientos como: Sello Forjadores del Futuro (2019), Distinción Joven por la Vida en apoyo al enfrentamiento a la COVID19 otorgado por la UJC (2020), Mérito al Humanismo, sensibilidad y solidaridad otorgado por el MINSAP (2020) y la Orden Lázaro Peña de I Grado, otorgada por el Consejo de Estado de Cuba (2021).
Durante los dos años de pandemia (2020-2022) he trabajado en el proyecto de Vacuna COVID19, en la liberación de lotes de antígenos para obtención de candidatos vacúnales contra la covid19, así como de lotes de RBD-Fch, Ace2-Fch y Ace2-Fcm para uso como diagnóstico de COVID19 y para la caracterización de diferentes candidatos vacúnales contra la covid19; en la evaluación de la respuesta inmune inducida por diferentes candidatos vacúnales SOBERANA en diferentes modelos animales; en el establecimiento de nuevo ensayo de inhibición (ELISA basado en células) para estudio de respuesta inmune inducida por diferentes candidatos vacúnales de SOBERANA. Además, soy analista de los ensayos clínicos para evaluar calidad de respuesta inmune inducida por las vacunas SOBERANA.
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