VIII International Symposium on Chemistry and Pharmaceutical Sciences
SICF
VIII Symposium "Design, Obtaining and Development of Drugs"
Abstract
From the receptor-binding domain (RBD) of the SARS-CoV-2 virus, which causes COVID-19, an RBD-hFc fusion protein was synthesized in the Center of Immunology Molecular (CIM) with the crystallizable fragment (Fc) of human immunoglobulin linked at the C-terminal of the protein. This fusion protein was used in the construction of a diagnostic tool for COVID-19 called UMELISA SARS-CoV-2-IgG. Given the relevance of this novel diagnostic system and the potential applications of the recombinant RBD-hFc protein in future treatments against COVID-19, a study was carried out to characterize the protein using chromatographic and spectroscopic techniques. Using polyacrylamide gel size electrophoresis, the molecular weight of the protein was estimated to be 120kDa. Using Isoelectric focusing, its isoelectric point was estimated between 8.3 and 9. By means of Far Ultraviolet Circular Dichroism it was determined that the protein has a secondary structure in the form of a sheet-β fundamentally. Using this technique, a thermodynamic study was carried out and it was determined that the mean denaturation temperature (Tm) of the protein is 71.5ºC. Information about the tertiary structure of the protein was obtained by means of Near Ultraviolet Circular Dichroism and Molecular Fluorescence. In addition, a peptide mapping of the protein was performed using Inverted Phase Liquid Chromatography (RPLC) on High Performance Liquid Chromatography (HPLC).
Resumen
A partir del dominio de unión al receptor (RBD) del virus SARS-CoV-2, causante de la COVID-19, en el Centro de Inmunología Molecular (CIM) se sintetizó una proteína de fusión RBD-hFc con el fragmento cristalizable (Fc) de las inmunoglobulinas humanas enlazado en el extremo C-terminal de la proteína. Esta proteína de fusión fue empleada para la construcción de un diagnosticador para la COVID-19 llamado UMELISA SARS-CoV-2-IgG. Dada la relevancia que posee este novedoso sistema de diagnóstico y por las potenciales aplicaciones de la proteína recombinante RBD-hFc en futuros tratamientos contra la COVID-19, en este trabajo se llevó a cabo un estudio de caracterización de la proteína mediante técnicas cromatográficas y espectroscópicas. Mediante la técnica de electroforesis por tamaño en gel de poliacrilamida se estimó que la masa molecular de la proteína era de 120kDa. Utilizando el Isoelectroenfoque se estimó su punto isoeléctrico entre 8,3 y 9. Su perfil de impurezas fue analizado mediante Cromatografía de Exclusión por Tamaños. Mediante Dicroísmo Circular en el ultravioleta lejano se determinó que la proteína presenta una estructura secundaria en forma de hoja-β fundamentalmente. Utilizando esta técnica se realizó un estudio termodinámico y se determinó que la temperatura media de desnaturalización (Tm) de la proteína es de 71,5ºC. Mediante Dicroísmo Circular en el ultravioleta cercano y Fluorescencia Molecular se obtuvo información acerca de la estructura terciaria de la proteína. Además se realizó un mapeo peptídico de la proteína utilizando la Cromatografía Líquida de Fase Invertida (RPLC) en Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC).
About The Speaker
Ingrid Ruiz
Discussion
