VIII International Symposium on Chemistry and Pharmaceutical Sciences
SICF
VIII Symposium "Design, Obtaining and Development of Drugs"
Abstract
Erythropoietin (EPO) is a 30-kDa glycoprotein regulating erythropoiesis. It inhibits programmed cell death in erythroid cells, regulates the proliferation, differentiation and maduration of erythroid precursor cells. In addition, EPO is a cytokine with a broad action on the Central Nervous System (CNS), where it is able to target multiple pathways that are deregulated in neurodegenerative diseases. A new EPO derivative formulation (NeuroEPOplus) with a low content in sialic acid, and therefore devoid of hematopoietic effects has been produced by Center for Molecular Immunology.
As NeuroEPOplus is a novel product that moves into the clinic, future in-depth investigation is needed to implement an in vitro bioassay as alternative method to evaluate the biological activity of according mode of action of this molecule.
In this work, we reported the EPOR expression and it signaling pathways by flow cytometry, immunofluorescence and immunostaining in TF1 human erythroid cell line. Also, we developed a new proliferation bioassay based on determining the potency of NeuroEPOplus in TF1 cell line by Alamar Blue colorimetric assay.
The treatment with NeuroEPOplus is able to avoid apoptosis and to induce the cell proliferation through EPOR and STAT3 phosphorylation. Also, we report that TF1 cell culture is a suitable in vitro biomodel to assess the relative potency of NeuroEPOplus.
Resumen
La eritropoyetina (EPO) es una glicoproteína de 30 kDa que regula la eritropoyesis. Inhibe la muerte celular programada en las células eritroides y regula la proliferación, diferenciación y maduración de las células precursoras. Además, la EPO es una citocina que actúa sobre el Sistema Nervioso Central (SNC), donde es capaz de regular múltiples vías de señalización en enfermedades neurodegenerativas. El Centro de Inmunología Molecular ha producido una nueva formulación derivada de EPO (NeuroEPOplus) con un bajo contenido en ácido siálico y, por lo tanto, sin efectos hematopoyéticos.
Dado que NeuroEPOplus es un producto novedoso que se traslada a la clínica, se necesita una futura investigación para implementar un bioensayo in vitro como método alternativo para evaluar la actividad biológica según el modo de acción de esta molécula.
En este trabajo, reportamos la expresión de EPOR y sus vías de señalización mediante citometría de flujo, inmunofluorescencia e inmunotinción en la línea celular eritroide humana TF1. Además, desarrollamos un nuevo bioensayo de proliferación basado en la determinación de la potencia de NeuroEPOplus en la línea celular TF1 mediante el ensayo colorimétrico con el Alamar Blue.
El tratamiento con NeuroEPOplus es capaz de inhibir la apoptosis e inducir la proliferación celular mediante la fosforilación de EPOR y STAT3. También demostramos que el cultivo de células TF1 es un biomodelo in vitro adecuado para evaluar la potencia relativa de NeuroEPOplus.
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Wilden Diaz González
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