VIII International Symposium on Chemistry and Pharmaceutical Sciences

SICF

VIII Symposium "Design, Obtaining and Development of Drugs"

Gel-clot method as an alternative for the determination of bacterial endotoxins. An study case.

Abstract

The concentration of bacterial endotoxins is one of the critical quality attributes of injectable biological products that guarantee their safety, since their presence in large doses is associated with the appearance of undesirable effects and can even cause death by shock. At the Center for Molecular Immunology (CIM) the kinetic chromogenic method described in the Pharmacopeias is routinely used. However, in the current economic context of the industry, it is necessary to implement less expensive alternative methods with the same regulatory standard, so the objective of the work was to develop the Gel-clot method described in the Pharmacopoeias for the determination of bacterial endotoxins in the productive processes of the CIM. The Pyrosate kit (Associates of Cape Cod, USA) was used and the performance of the method was verified according to the pharmacopoeia. The evaluation of the sensitivity of the lysate corroborated the sensitivity described by the manufacturer (0.03 EU/mL) under laboratory conditions. No interferences (inhibition/enhancement) were found in Center for Molecular Immunology´s products. The Pyrosate kit was shown to be suitable for the determination of bacterial endotoxins by the Gel-clot method. Its implementation for the quality control of pharmaceutical waters and intermediates and finally products of production processes constitutes a reduction in test costs (less expensive kit) with a similar regulatory standard, provides greater operational simplicity (requires less time and less expensive equipment) and increases analytical capability of the test (evaluation capacity of many samples).

Resumen

La concentración de endotoxinas bacterianas es uno de los atributos críticos de calidad de productos biológicos inyectables que garantizan su seguridad, debido a que su presencia en grandes dosis se asocia a la aparición de efectos indeseables y puede llegar a ocasionar la muerte por shock. En el Centro de Inmunología Molecular (CIM) se emplea habitualmente el método cromogénico cinético descrito en las Farmacopeas. Sin embargo, en el contexto económico actual de la industria, se hace necesario la implementación de métodos alternativos menos costosos con igual estándar regulatorio, por lo que el objetivo del trabajo consistió en desarrollar el método de gelificación descrito en las Farmacopeas para la determinación de endotoxinas bacterianas en los procesos productivos del CIM. Se empleó el juego de reactivos Pyrosate (Associates of Cape Cod, EUA) y se verificó el desempeño del método según farmacopea. La evaluación de la sensibilidad del lisado corroboró la sensibilidad descrita por el fabricante (0,03 UE/mL) bajo las condiciones del laboratorio. No se encontraron interferencias (inhibición/realce) en productos del CIM. Se demostró que el juego de reactivos Pyrosate es adecuado para la determinación de endotoxinas bacterianas por el método de gelificación. Su implementación para el control de calidad de aguas farmacéuticas y productos intermedios y finales de los procesos productivos constituye una reducción de los costos del ensayo (kit menos costoso) con similar estándar regulatorio, proporciona mayor simplicidad operacional (requiere menos tiempo y equipamiento menos costoso) y aumenta la capacidad analítica del ensayo (capacidad de evaluación de mayor número de muestras).