VIII International Symposium on Chemistry and Pharmaceutical Sciences

SICF

VIII Symposium "Design, Obtaining and Development of Drugs"

Study of thermal stress of the RBD molecules

Abstract

RBD-his (aa 319 - 541) in both monomeric and dimeric forms constitute the raw material for the preparation of vaccine candidates against COVID 19. The manufacturer of the active raw material is responsible for ensuring that it maintains its quality during the shelf life and in the declared packaging and storage conditions, so you must know the main degradation products that your product presents and identify sensitive and specific analytical methods that allow detecting the possible changes that it may present during its storage. The evaluation of the thermal stress of the biological raw material RBD-his (aa 319 - 541) in its monomeric and dimeric form was done at 37ºC for a period of 30 days. The samples were tested according to the time intervals programmed for the different assays. The results obtained show that in monomeric RBD the main degradation products are aggregates that can be detected by gel filtration (HPLC-GF). Dimeric RBD was more unstable than the monomer and different molecular species coexist because of heat stress, aggregates and fragments of different molecular weights. These by-products are detectable by gel filtration, SDS PAGE, and Analytical Reverse Phase Chromatography (HPLC-RP). Additionally, the degradation of dimeric RBD was detected by the fluorescence spectrum of Trp. The ACE2 ELISA detected the biological activity decreasing.

Resumen

RBD-his (aa 319 - 541) tanto en forma monomérica como dimérica constituyen la materia prima para la preparación de candidatos vacunales contra el COVID 19. El fabricante de la materia prima activa es responsable de asegurar que esta mantenga su calidad durante la vida útil y en las condiciones de envasado y almacenamiento declaradas, por lo que debe conocer los principales productos de degradación que presenta su producto e identificar métodos analíticos sensibles y específicos que permitan detectar los posibles cambios que pueda presentar durante su almacenamiento. La evaluación del estrés térmico de la materia prima biológica RBD-his (aa 319 - 541) en su forma monomérica y dimérica se realizó a 37ºC por un período de 30 días. Las muestras se ensayaron según los intervalos de tiempo programados para los diferentes ensayos. Los resultados obtenidos muestran que en RBD monoméricos los principales productos de degradación son agregados detectables por filtración en gel (HPLC-GF). El RBD dimérico fue más inestable que el monómero y coexistieron diferentes especies moleculares debido al estrés por calor, agregados y fragmentos de diferentes pesos moleculares. Estos subproductos son detectables por filtración en gel, SDS PAGE y cromatografía analítica de fase inversa (HPLC-RP). Además, la degradación de RBD dimérico fue detectada por el espectro de fluorescencia de Trp. El ELISA ACE2 detectó la disminución de la actividad biológica.