VIII International Symposium on Chemistry and Pharmaceutical Sciences

SICF

VIII Symposium "Design, Obtaining and Development of Drugs"

Validation of the IL-2 non-alpha mutein biological activity assay

Abstract

Introduction: The non-alpha mutein of IL-2 (mutIL-2) is a variant of human interleukin-2 (IL-2) with the ability to stimulate the main effector cells of the antitumor response sensitive to IL-2. This is the basis of the colorimetric proliferation assay of the CTLL-2 murine cell line, widely used for the determination of the in vitro biological activity of commercial IL-2, as well as for other cytokines of the family. Due to the development phase of the product, a robust and reliable method for measuring this quality attribute is necessary. Objective: To validate the method of in vitro biological activity of the non-alpha mutein of IL-2 by cell proliferation of the CTLL-2 line. Materials and Methods: This assay reports the relative potency of mutIL-2 by incubating the cell line with different concentrations of the molecule. The robustness of the method, its specificity, linearity, accuracy, precision and range were evaluated. Results: The assay is robust and specific for the active conformation of the molecule and there is no interference with matrix components. It was shown that the method is linear with a correlation coefficient of r=0.99. In the recovery study, values between 74 and 126% were obtained in an estimated range between 50% and 200%. The assay presented an intra- and inter-assay variability of less than 10%. Conclusions: The method is robust, specific, linear, exact and precise in the range of 50% to 200%.

Resumen

Introducción: La muteína no alfa de IL-2 (mutIL-2) es una variante de la interleucina-2 (IL-2) humana con la capacidad de estimular a las principales células efectoras de la respuesta antitumoral sensibles a la IL-2. Esta es la base del ensayo colorimétrico de proliferación de la línea celular murina CTLL-2, ampliamente extendido para la determinación de la actividad biológica in vitro de la IL-2 comercial, así como para otras citocinas de la familia. Debido a la fase de desarrollo en la que se encuentra el producto, se hace necesario un método robusto y fiable para la medición de este atributo de calidad. Objetivo: Validar el método de actividad biológica in vitro de la muteína no alfa de IL-2 por proliferación celular de la línea CTLL-2. Materiales y Métodos: Este ensayo reporta la potencia relativa de la mutIL-2 mediante la incubación de la línea celular con diferentes concentraciones de la molécula. Se evaluó la robustez del método, su especificidad, linealidad, exactitud, precisión y rango. Resultados: El ensayo es robusto y específico para la conformación activa de la molécula y no hay interferencias con los componentes de la matriz. Se demostró que el método es lineal con un coeficiente de correlación de r=0,99. En el estudio de recobrado se obtuvieron valores entre 74 y 126% en un rango estimado entre 50% y 200%. El ensayo presentó una variabilidad intra e inter-ensayo menor del 10%. Conclusiones: El método es robusto, específico, lineal, exacto y preciso en el rango de 50% a 200%.